有没有批量提取DNA的简便方法?

求大批量提取DNA的简便方法,最近实验室要对转基因的材料进行pcr检测,估计要提取数以千计的水稻叶片dna。实验室一直用ctab法。因为只用于pcr检测,dna的量和质量要求都不高,请问各位同学有没有简便快捷的提dna方法?

提供一个方法,我最近一直用这个方法提取拟南芥DNA用于PCR,效果很好,方便快捷。见文献
A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis
K.Edwards, C.Johnstone and C.Thompson
Nucleic Acids Research, Vol. 19, No. 6 1349

 

实验室提拟南芥DNA,EDARDS溶液简易法用机器震荡完成,如果熟练加努力,一个人一天能提好几百个。

 

液氮提取啊,收率很高的,而且方便

 

应该是edwards,另外可以用叶片组织直接PCR的,可以自己摸索,也可以向公司购买。

 

我是小白来学习下~写写楼上的帮助

 

上面这位师兄的这篇文献所叙述的方法被广泛应用中,实际操作过程中,个人不建议在提取液中加入CTAB,那样可能会导致DNA扩增不出来,具体什么原理,小妹暂时也还么有搞懂,但实践证明不加CTAB,提取的水稻DNA效果很好。并且耗时很短。几千个的话,快的话几天就搞定了。。

 
请问能说说你的详细步骤吗?是不是和文献上的完全一样:
用离心管切下叶片,然后用一次性的研磨棒磨碎,加入提取液,漩涡混匀5 s,室温静致1小时。13000 rpm离心1 min,取上清加入适量异丙醇沉淀核酸,13000 rpm离心5 min,干燥沉淀加水溶解。
这两周我在做race,导师单人匹马用传统的ctab法把几千个样都搞掂了....不过再过几个月又要检测晚造的植株了,还是想要试一试简便的方法。
 
你们导师是一位很强悍的人啊,这点上,让人佩服,作为学生的我们实在是感到汗颜。
     上面那位前辈的文献我看了,其实有些步骤是不一样的,比如说我们添加了一步酒精清洗DNA,这样的DNA比不清洗的肯定要好。
     但是师兄不知道你提这个DNA干什么用的,有点必须说清楚,SDS法提取的是微量DNA,如果是做定位什么的,这个方法还是稍显欠缺的。传统CTAB法自然是有它的道理。
    那么下面就说说一般我们是怎么做的吧。
    首先磨碎加入提取液混匀,我们甚至没有用到漩涡震荡仪,静置一段时间,具体我还真没怎么记是多久,反正一个小时以内了,然后12000离心2min,吸取上清,加入异丙醇沉淀,静置两分钟,适量混匀。12000离心5min,去除上清,加入75%酒精清洗,离心5min,去酒精,干燥沉淀,加入ddh2o溶解。


我就是核酸提取后,PCR多态性扩增不出条带(白板),是什么原因呢?用的引物是ISSR,材料是果树类莲雾叶片,体系没有问题,是让别人一块的带着混样的,模板量是母液稀释30倍后加2微升,提取步骤:CTAB法,酚-氯仿-异戊醇抽提10min,氯仿-异戊醇抽提10min, 异丙醇沉淀,TE溶解,RNA酶处理,氯仿-异戊醇抽提10min, 异丙醇沉淀;dd水溶解===这种情况是年后才出现的,以前的时候没有问题,已经提取了好多次了,有的时候是刚提取后 就扩增条带很好,然后不到一周就又不行了,搞不明白啊~~
 
十分感谢。我们提DNA只是为筛选转基因的水稻植株,DNA的质量要求不高。
另再问,你是用液氮磨碎样品的吗?用的提取液应该是和文献的一样的吧:200 mM Tris HCl pH 7.5, 250 mM NaCl, 25 mM EDTA, 0.5% SDS。

 
同学你的DNA质量如何呢?譬如说扩actin之类的正对照能扩出来么?
 
 
正对照是怎么跑的呢?DNA质量个人认为还行吧,方法是实验室传统方法,以前都没问题,一直在找原因,头都大了~·

 
师兄啊我倒是想帮你分析呀,但是我没有实际用CTAB操作过,都是理论上的知识,小妹现在也就开始做实验顶天三个月,积淀还差的远,有心无力。
      个人觉得吧实际做实验的时候什么情况都能出现。还真说不出来个所以然。有几次我更纠结呢,一个Indel引物第一次P出来了,后面四次一次都没有P出来。模板,引物,PCR条件都试过了,这个到现在都不知道什么原因。
      你说有时候刚提取出来的扩增条带很好,不到一周就不行了,是不是DNA被降解了?一般来说DAN放在4度冰箱是可以保存两个月的。小妹一般溶解DNA喜欢用Tris pH 8.0 10mM。要不然师兄你试试吧。。。

 
水稻的话是要而且动作一定要快,液氮的,不然叶片咋个弄的碎哟,提取液用1.5%SDS吧。感觉0.5%的话,稍微有点低。
 
请问一下师姐,要取多少的样呢?可否用液氮磨碎后,再转移到EP管,再加提取液?
 
首先答案是肯定的,这样子弄可以的撒。
但是为什么要这样做呢?
在液氮磨碎后转移到EP管?你们用研钵磨碎的吗?
还是说你们的样本很难于磨碎,必须使用这样的方式才能磨碎。
一般来说禾本科类的植物取样本的量如水稻只需要3~5分之一叶片就足够了,当然这个也是要根据你做的实验的要求来的。
个人觉得如果做水稻这类禾本科植物的话不需要这么麻烦,这样既浪费液氮,样本的取样量要求也必较大,中间肯定有损失的撒。其他比如木本植物什么的话,可以试试
 

一般都是酚-氯仿抽提法

 
我提拟南芥用的!要求不高,PCR就好!
 
这个提出来,黑乎乎的一坨!明显的不是DNA啊!(EDTANa2 代替了EDTA)
 
话说我也是做拟南芥的哇
用这个方法简单方便,很快的
至于为什么会黑乎乎一坨我还真没遇到过?关键是你还用的是坨?
难道不是液体?你提出来是固态?????
 

不好意思上面这个说法有问题哈,按理来说溶解后的DNA应该是无色的吧?

 
用异丙醇沉淀后,去上清,就是黑乎乎的了!目测是蛋白,加70%乙醇洗2次~ddH2O溶不了!

 
这个要怎么说好呢
SDS这个方法大家运用的都已经很熟悉了
禾本科类的植物用这个方法都很快捷简单
现在来回答生理生态学的这位虫友哈,因为没有名字只能这么称呼了
至于我怎么提取的,具体方法请参照前面回帖,这里就不再说了
提取液的配方请参照前面的用量,第一次吸取的上清液应该是无色或者绿色的。说是无色的是因为如果你取样特别微量(拟南芥播种后大约20天左右的苗去其叶片)的话,可能是看不到什么东西的,但DNA是能提出来的。
如果这步么有问题,那么加入异丙醇沉淀,在管底可能会看到白色的沉淀物的。为啥我又要说可能呢?完全是因为拟南芥这个东西基因组本来就小,样本再一小,提取出来的量就可能肉眼不见咯。
如果是水稻的话,可以看到很明显的白色沉淀哈~~
如果这样子还在黑乎乎的话,就不知道怎么回事了。。。
只能说求人品。。。。
 

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请问你在析出DNA那一步,加入-20度无水乙醇后放在-20度冰箱中多久啊。放久了会不会对DNA有影响啊。
 

水稻直接丁丁点叶片,想办法捣烂巴点,加NaOH95度煮煮数分钟,加点酸中和,上清液就可以去做PCR了