PCR的时候误加了PBS有影响吗?

1、PCR的时候,本来是要加无菌水的,结果误加了PBS,会不会有什么影响?会不会P不出来?
2、提了几个细菌的基因组之后,准备将其稀释做PCR的模版,一般都是用的无菌水稀释,如果我用的是PBS,并在-20℃保存备用。这样处理之后,还能不能用来做后续的实验(如PCR等)?

1479771d3a.gif

首先你这种情况还真没碰到过。PBS和无酶水的区别是多了几种离子,钾离子,钠离子,氯离子等等。但是我记得这些离子不会对体系中酶的活性产生影响,倒是在对产物跑胶的时候会产生影响。其次,PBS的PH好像是在7.3左右,不知在此PH下会不会对酶活性有影响?!PH的影响可能是主要的。最后,由于你用的PBS应该是普通的,不是无酶的,那么如果有杂质的话可能也会产生影响。事实上PBS中是有杂质的,因为根据经验,我们配的PBS长期存放后会有沉淀。

因为我没遇到这种情况过,所以只能帮你分析,不能给你确定答案,个人建议楼主可以去尝试做一下,看你做的结果之后再做决定


我个人感觉普通的Taq酶对体系及成分要求并不是特别严谨 我7uL体系(本应该10uL的)P成功过 有人错拿NaOH代替蒸馏水也P成功过
但是高保真系列酶我就说不上了................
如果你做错了 对于PCR这种需要反复尝试的实验 先将错就错做下去 出了看结果再说 其实我们都曾心里自己安慰自己:“说不定结果更好了呢”

 

其实这种情况,就p一下试试呗,如果p不出来再重新做呗,只是有一样,有些离子的存在可能在一定程度上影响聚合酶的保真度,所以还是要谨慎