为什么外源蛋白诱导表达量特别少？

外源蛋白诱导表达量特别少，求大侠解惑

本人研一，老板让我做一个蛋白的抗体，首先得将该蛋白外源诱导表达出来
我的目的基因大小是3600，目的蛋白大概130KD
用的载体是HisB，大约4400bp
酶连很顺利，开始用的是大肠JM109进行表达，0.5M的IPTG，37度诱导6小时
一跑胶发现有条带可是特别细，做了几次诱导效果都不怎么好
不知道到底是什么原因？难道因为外源片段太大了载体承受不了？或者宿主菌不对？诱导的条件需要改进？
求高人指点，不胜感激~~~

超过100KDa的蛋白不是很好表达，可以试试不同的宿主。

你换Top10做什么啊，这个是克隆宿主，不是表达宿主。。。

对啊，你应该用表达宿主BL21或其他
而且我觉得还要看你用的是什么vector

我们这边有人就是用TOP10做HISB的表达啊,而且效果很好呢
刚用TOP10取的样跑了个胶,效果跟JM109差不多,也很细
转了BL21的刚长上

对啊，你应该用表达宿主BL21或其他
而且我觉得还要看你用的是什么vector

呵呵,BL21转了几次了都不长的,今天终于长了,准备试一试
载体是HISB,查了一下可以用JM109和BL21,不过也有很多人用TOP10的

LZ的蛋白可溶性高吗？如果可溶性低的话纯化的两是很少的~

晕死。怎么能用克隆宿主的哇。。。。
要用表达宿主。

我遇见很多这种同学了。。
一定要配套好表达载体和宿主。。。
额。。楼主好好学习下p ET系列的基本知识。

LZ的蛋白可溶性高吗？如果可溶性低的话纯化的两是很少的~

我也想了这个问题，所以今天拿沉淀跑了个胶，还不知道结果

诱导温度是不是太高了啊