分光光度计的工作原理

紫外可见分光光度计的工作原理主要是基于朗伯-比耳定律。18世纪初,琅伯在前人的基础上,进一步研究了物质对光的吸收与物质厚度的关系,并于1760年指出:如果溶液的浓度一定,则光对物质的吸收程度与它通过的溶液厚度成正比,这就是朗伯定律,其数学表达式为:

V-5100型可见分光光度计

A=lgI。/I=K。b

式中,A为吸光度;I。为入射光强度;I为透射光强度;b为液层厚度(即光程);K。为比例常数。

1852年,比耳研究了各种无机盐的水溶液对红光的吸收后指出:光的吸收和光所遇到的吸光度的数量有关;如果吸光物质于不吸光的溶剂中,则吸光度和吸光物质的浓度成正比,这就是比耳定律,其数学表达式为:

A=lgI。/I=K1C

式中,A为吸光度;I。为入射光强度;I为透射光强度;C为溶液的浓度;K1为比例常数。

将朗伯定律和比耳定律结合起来,则为朗伯-比耳定律,公式如下:

A=lgI。/I=K2bC

式中,A为吸光度;I。为入射光强度;I为透射光强度;C为溶液的浓度;b为液层厚度(即光程);K2为比例常数。

朗伯-比耳定律认为:当一束光平行的单色光通过某一均匀的有色溶液时,溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比,这就是朗伯-比耳定律的真正物理意义,它是光度分析中定量分析的最基础、最根本的依据,也是紫外可见分光光度计的基本原理。

分光光度计正是根据朗伯-比耳定律,对物质进行定量和定性分析的。